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納米銀對牙本質(zhì)表面糞腸球菌生物膜的殺菌作用
信息來源: http://www.qdhlgjgzj.cn 時間:2018-10-30 16:15:18
摘要:目的 就納米銀對牙本質(zhì)表面糞腸球菌生物膜的殺菌作用進行探討。方法 收集80顆無齲壞、完整無缺的前磨牙,將其制成309個牙本質(zhì)片,隨機分為A組(納米銀組)、B組(次氯酸鈉組)、C組(氯化鈉組),每組有103個樣本?;罹溆嫈?shù)法檢測糞腸球菌生物膜活菌數(shù),糞腸球菌生物膜的內(nèi)層活菌、中間層活菌、外層活菌百分比用激光共聚焦顯微鏡來進行觀察。結(jié)果隨著0.1%納米銀溶液的處理時間的延長,糞場球菌生物膜活菌的數(shù)量呈現(xiàn)出較為明顯的降低趨勢,到24h之后就沒有活菌出現(xiàn)在生物膜內(nèi)。與此同時,生物膜內(nèi)層、中間層、外層活菌的平均厚度、百分比逐漸減少。結(jié)論 對于糞腸球菌生物膜而言,含量為0.1%的納米銀溶液有著較強的殺菌作用和滲透能力,能夠隨著處理時間的延長而讓殺菌作用增強,最佳的作用時間為處理24h以上。
關(guān)鍵詞:納米銀;牙本質(zhì)表面;糞腸球菌生物膜;殺菌作用
從目前來看,再感染根管中最常檢測到的細(xì)菌為糞腸球菌,它也是主要的致病菌。在這種情況下,尋找出一種有效、安全的抗菌劑,是提高根管治療成功率的重要途徑之一。而納米銀的生物安全性良好、抗菌性能較強,特別適用于作為新型抗菌劑[1]。本文就納米銀對牙本質(zhì)表面糞腸球菌生物膜的殺菌作用進行探討。
1 資料與方法
1.1一般資料
1.1.1實驗菌株 選擇由廣東省微生物研究所提供的糞腸球菌。
1.1.2主要實驗試劑 心腦浸出液培養(yǎng)基、含量為5.25%次氯酸鈉溶液、含量為0.1%納米銀溶液、含量為0.9%氯化鈉溶液。
1.1.3主要實驗儀器:FV500-IX81激光共聚焦顯微鏡、B3510E-DTH超聲清洗器、11-1280-250型切片機、JSM-6330E場發(fā)射掃描電鏡、LI20-2恒溫培養(yǎng)箱、厭氧罐。
1.2方法
1.2.1牙本質(zhì)片的制備及分組 收集80顆無齲壞、完整無缺的前磨牙,將其制成309個牙本質(zhì)片,隨機分為A組(納米銀組)、B組(次氯酸鈉組)、C組(氯化鈉組),每組有103個樣本。樣本經(jīng)超聲清洗、滅菌之后保存在無菌PBS緩沖液內(nèi),保存溫度控制在4℃。
1.2.2構(gòu)建牙本質(zhì)表面糞腸球菌生物膜:復(fù)蘇糞腸球菌后,將其放置在BHI液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),培養(yǎng)溫度控制在37℃,培養(yǎng)時間控制在16h。菌懸液用BHI液體培養(yǎng)基來調(diào)整到1×107CFU/ml,按每孔2ml加到24孔板內(nèi),每孔1個樣本。
1.2.3糞腸球菌生物膜的表面形態(tài)進行掃描電鏡觀察:將A、B、C組樣本都進行24h培養(yǎng),然后從其0h小組中隨機取3個樣本,將這些樣板上沒有黏附的細(xì)菌用雙蒸水清洗2次以上,再進行固定制樣,以此觀察糞腸球菌生物膜的表面形態(tài)。
1.2.4活菌菌落計數(shù)法檢測糞腸球菌生物膜活菌數(shù) 分別采用含量為5.25%次氯酸鈉溶液、含量為0.1%納米銀溶液、含量為0.9%氯化鈉溶液對樣本進行處理,在處理之前的1、6、12、24h時分別從三組中各取10個樣本,雙蒸水清洗2次,然后再將其放入無菌PBS的試管中,培養(yǎng)48h后菌落計數(shù)。
1.2.5糞腸球菌生物膜的內(nèi)層活菌、中間層活菌、外層活菌百分比用激光共聚焦顯微鏡來進行觀察。
2 結(jié)果
隨著0.1%納米銀溶液的處理時間的延長,糞場球菌生物膜活菌的數(shù)量呈現(xiàn)出較為明顯的降低趨勢,到24h之后就沒有活菌出現(xiàn)在生物膜內(nèi)。與此同時,生物膜內(nèi)層、中間層、外層活菌的平均厚度、百分比逐漸減少。生物膜結(jié)構(gòu)被含量為0.1%納米銀溶液處理1h之后,并沒有完全解體,但生物膜內(nèi)層活菌百分比降至(20.8%±4.5%),中間層活菌百分比降至(27.4%±5.6%);在處理6h之后,生物膜內(nèi)層活菌百分比降至(1.8%±0.9%),中間層活菌百分比降至(2.0%±0.9%)。0.1%納米銀溶液處理12h、24h,生物膜各層活菌百分比與1.313%次氯酸鈉溶液組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),但是都要明顯低于0.9%氯化鈉溶液組,存在著統(tǒng)計學(xué)意義。作者: 趙亮 閆磊 陰平 付爽 袁雪明 周立波
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